高效液相色谱柱前保护柱具体怎么用?

  使用时应该用对应的保护柱,如C18柱用C18的保护柱,第一次使用时先冲洗干净保护柱,再连接到柱子上,保护柱的填料和柱子一样,所以也有一定的分离作用,但是会增加死体积。保护柱一般不会损坏色谱柱,柱子损坏先看是不是你使用不当造成的,例如C18柱不宜用PH大于7的流动相和纯水系流动相。

  第一次使用前,最好先处理一下。我们一般是用65%的乙腈/水溶液在0.1-0.5ml/min低速的情况下冲20min,这一过程最好别接检测器。然后,再渐渐将流速调至1ml/min继续冲2-8小时。

  平时使用的时候,注意色谱柱适用的PH值范围、水相的比例(长时间使用水相比例高的流动相会损伤ODS柱)。在使用含有缓冲盐的流动相时,更换前要注意用含水量较多的甲醇过渡,使用完毕后也要含水量较多的甲醇过渡冲洗。

  要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手:

  (1)降低移动相的流速,但会使分析时间延长。

  (2)减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。

  (3)减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。

  (4)选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。

  (5)适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分离度也随之降低。

  (6)尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。

  为什么高效液相色谱柱管较短,而气象色谱柱管较长?

  得从气相色谱柱和高效液相色谱柱的填料说起。高效液相色谱柱采用的填料粒径很小,常规5-20um,填料还有涂层、键合物等,这样物质在经过色谱柱的时候分配的次数就相当多了。气相色谱柱的填料粒径较大,或是无填料,与液相色谱柱比较起来的话,气相的色谱柱单位长度的理论塔板数要远远低于液相,为了达到比较理想的分离效果,要求理论塔板数要达到一定的数量,因此气相的色谱柱一般都比高效液相的色谱柱长得多。

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